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小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒

點擊次數(shù):841 發(fā)布時間:2019/5/23
提 供 商: 上海撫生實業(yè)有限公司 資料大小:
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                         小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒

用途
該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度。
 
 
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上,實驗時樣品或標(biāo)準品中的抗原會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準曲線計算出樣品中指標(biāo)的濃度。

操作步驟
1. 標(biāo)準品的加樣:設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔,標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品50μL;。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
試驗所需自備物品
1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙

 
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